DNA 추출의 기본 원리~!

안녕하세요~!

샤봉입니다~!!^^

오랫만에 아주 오랫만에....본업이랑 관련된 포스팅을 하려고 하는데요....^^

막상 쓰려고..하니...말로는 하겠는데...글로는 정리가 안되네요...^^ 바로 시작할께요~!!

이글에서는 자세한~! DNA 추출 순서는 없습니다~!

Promega 메뉴얼 DNA 추출 Page - 사이트 안에 프로토콜 다운받아서 읽어보셔욧~!^^

https://www.promega.kr/products/nucleic-acid-extraction/genomic-dna/reliaprep-blood-gdna-miniprep-system/?catNum=A5081

Qiagen 메뉴얼 DNA 추출 Page - 사이트 안에 프로토콜 다운받아서 읽어보셔욧~!^^

https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/dna-rna-purification/dna-purification/genomic-dna/qiaamp-dna-blood-mini-kit/#orderinginformation

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DNA를 뽑는 샘플은~! 혈액 Blood 로 설정하겠습니다~!!

그리고~~ Column 방식과 Bead 방식이 있는데~! 이 설명은 나중에 하고 기본 원리만 설명하겠습니다!!

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1. 혈액에서 DNA를 뽑기 위해서는 DNA가 들어있는 핵을 터트려야~~ 합니다!!! 빵!!!!!!!!!!

혈액에서 핵이 있는 세포는 백혈구(WBC) 인데요~! 

백혈구의 세포막을 부시는 역할을 하는 것이~~ Lysis Buffer 입니다.!

뭐 SDS 라고도.. 계면활성제..등으로도 표현되지만.!!

세포막을 부수고~~ 핵안에~~ DNA가~~ 막 튀어나오고~~그러나~~ 히스톤 단백질에~~ 감겨져 있고~~

이 상태로 추출이 진행이되면 히스톤단백질이 그대로 딸려가기에~~히스톤단백질을 제거하기 위해!

Proteinase K Buffer를 넣어 줍니다~! 역할은 단백질을 분해시킵니다~!

히스톤단백질을 제거하여~ 순도를 높여줍니다.!!

그래서 모든 DNA 추출 키트의 처음은 Proteinase K Buffer 20ul + Blood 200ul + Lysis Buffer 200ul 로 1.5ml tube에 

담아놓고 시작합니다~!

그리고~!반응을 시키기 위해~!!  56도 Heat Block에서 10분 정도 반응 시킬껍니다~!^^

그리고~~!! Binding Buffer 라고 하여~!! 250ul 정도 넣고~~! 고염도~~ 농도 상태를 만듭니다~!

이유는 말그대로~~ Column이나 Bead에 부착시키기 위해서 입니다!

 

2. DNA를 부착시키고~! 나머지 찌끄러기를~~ 씻어줍니다~!!

Heat Block 반응하고, Binding Buffer를 넣고 혼합물 전량을 Column이나 Bead에 부착 시킵니다!!

원심분리나 Magnetic 반응을 통한 Wash를 진행합니다.!

퀴아젠 제품에 경우에는 100% 에탄올을~! 추가적으로 넣을 꺼고,

프로메가 제품은~~ 완제품으로 제조되어 있습니다~!

Wash Buffer의 원리는 Column과 Bead에 부착된 DNA가 떨어지지 않는 방식으로 진행되는데요~!

전하가 없는 에탄올을 이용하여~~! DNA가 떨어지지 않게 하고~! 물사용하면 바로 떨어집니다...ㅋㅋ

고염도 상태를 유지하기위해 Buffer를 첨가되어 있을 것입니다~!

그래서 Wash Buffer 들은 쓰다가 뚜껑열때 흰색 가루가 부스러기처럼 떨어지는데...이게 염분이 고체화

된게 아닐까...저는 생각합니다. ^^ ㅋ

반복을 통하여~~ 순수 DNA만 남게~~ 2~3회 Wash를 진행합니다!!^^

 

3. 물을 넣어줘가~~ 순수 DNA를 뽑아낸다!!!!!!!!!

Wash 진행 후~~ Column이나 Bead에는 DNA가 결합되어 있는데요~!!

DW 나 TE Buffer 를 넣어주면~! Column과 Bead가 DNA를 떨어뜨리고 물과 결합하게 됩니다.

추출원리는 간단합니다~! 저염 저농도인 물을 넣어주면~! 고염분상태에서 결합되었던~~결합이

끈어지게 되어~~ DNA가 물에 흡수되게 됩니다~!^^

 

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너무 이상하게 설명했는데요.... 이 원리만 아시면.,..어떤 방법의 추출을 하던지~~ 원리를 이해하시면서 추출할 수 있을꺼

라고 기대합니다....^^ 설명이 부족했다면~! 댓글로 질문해주세요~!!아는 선에서 답해드리겠습니다~!!

그리고 이 후 포스팅으로~! Column 방식의 원리.! Bead 방식의 원리~!! 포스팅하겠습니다!!^^

 

장황한 설명 읽어주셔서 감사합니다!!!^^